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DNA Blunting Kit
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Takara 6025 20 次 684 元
 
■ 制品内容 (20 次量)
T4 DNA Polymerase 20 μl
10×Buffer (含dNTP) 30 μl
DNA Dilution Buffer 500 μl
  (100 mM Tris-HCl < pH7.6,16℃> ,5 mM MgCl2)
Ligation Solution A* 600 μl × 2
Ligation Solution B* 150 μl
   
*:Ligation solution A和B与DNA Ligation Kit ver.1 (Code No.:6021) 通用。
 
■ 制品说明
DNA Blunting Kit可使具有3’或5’突出末端的DNA平滑化。在T4 DNA Polymerase 5’→3’的聚合酶活性和3’→5’的外切酶活性的作用下,两种不同形式的粘性末端可被同时平滑化。再使用本试剂盒中的连接液即可高效地将得到的平末端DNA与平末端载体相连。并且反应液不需纯化,可以直接用于细菌转化和体外包装等。
本试剂盒也可将载体DNA的末端平滑化。经平滑化后的载体DNA再进行去磷酸化后使用。
很多PCR产物都含有3’-dA末端,因而不能有效连入载体。如果使用本试剂盒将此类PCR产物末端平滑化,再根据实际情况进行磷酸化处理,就可以有效地连入平末端载体。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ DNA末端平滑化原理
 
使用注意
1. 本试剂盒可使具有去磷酸化的5’突出末端的DNA末端平滑,但不能使磷酸化的3’凹陷末端的DNA末端平滑。在鸟枪法克隆时,应注意超声波分解的DNA片段,可能会产生具有磷酸化的3’凹陷末端的DNA片段。
2. Ligation Solution A和B置于冰中融解,使用前快速混匀。
3. 做细菌转化时,连接液不需要做苯酚抽提便可直接使用。如果有必要浓缩,可用乙醇沉淀法精制DNA。
 
 

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