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PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Takara RR055A 50 次 1,457 元
Takara RR055B (A × 4) 200 次 5,245 元
 
■ 制品内容 (Code No.: RR055A)
PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 100 μl
2 × 1 Step Buffer 625 μl ×2
Control F-1 Primer (20 μM)*1 20 μl
Control R-1 Primer (20 μM)*2 20 μl
Positive Control RNA (2×105 copies/μl) 20 μl
RNase Free dH2O 625 μl ×2
 
*1 Positive Control RNA用上游引物。
*2 Positive Control RNA用下游引物。
 
 
■ 制品说明
PCR (Polymerase Chain Reaction;聚合酶链式反应) 是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA,RNA不能直接被扩增,但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后,PCR法便可应用于RNA的解析了。目前,RT-PCR方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
本试剂盒采用了一步 (One Step) RT-PCR法。RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中连续进行,反应中途不需添加任何试剂,降低污染风险。反转录反应使用了Takara Bio公司特别开发的新型反转录酶PrimeScript RTase。该反转录酶对具有复杂二级结构的RNA模板也具有很强的延伸能力;PCR反应使用了扩增性能优越的Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq® HS,大大提高了本试剂盒的扩增性能和反应特异性。在本试剂盒中,已将PrimeScript RTase、TaKaRa Ex Taq HS、RNase Inhibitor以及One Step RT-PCR用稳定剂等配制成了Premix型的PrimeScript 1 step Enzyme Mix;同时把反应用Buffer、dNTP以及One Step Enhancer Solution配制成了Premix型的2×1 Step Buffer的形式,使实验操作时的反应液配制更为简单方便。使用本试剂盒可进行高效的RT-PCR扩增。反转录温度可以设定为50℃,能够有效抑制非特异性扩增。另外,本试剂盒可减少由于错配和引物二聚体造成的非特异性反应。
本试剂盒中含有进行One Step RT-PCR反应用的全部试剂,可以方便有效地对RNA进行扩增分析。
 
■ 各种引物的序列
引物名称 各引物序列
Control F-1 Primer
       5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer
       5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
 
■ 原 理
PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2可在同一反应管中连续进行由PrimeScript RTase将RNA反转录为cDNA,再由TaKaRa Ex Taq HS扩增此cDNA的RT-PCR反应。
 
图1. PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2原理图
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 注意事项
1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时,应先配制至少10次量各种试剂的混合液,然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。
3. 2×1 Step Buffer使用前用vortex充分混匀,离心后使用。
4. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出,使用后也应立即放回-20℃中保存。
5. 为了防止Positive Control RNA分解,应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃~-80℃。
6. 分装试剂时务必使用新的枪头,以防止样品间污染。
7. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物,Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。
 
 

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