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产品选择指南

技术服务信息

机构用户解决方案

磷蛋白磁珠试剂盒
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Clontech 635641 Each 5,224 元
 
Code No. 产品名称
635641   TALON® PMAC Magnetic Phospho Enrichment Kit
 
■ 产品描述
本产品结合了TALON-磷酸化蛋白质富集试剂盒的磷酸特异性和磁珠分离法的便利性,与磁力架搭配使用,可为从哺乳动物细胞和组织中提取mg量的磷酸化蛋白质提供了简单快速的基于金属亲和的方法。
 
分离胞质蛋白质和膜结合蛋白质
试剂盒中包含磷酸化蛋白质富集磁珠和一整套的buffer,能够对含有磷酸化氨基酸侧链(包括丝氨酸,酪氨酸或苏氨酸)的所有类型磷酸化蛋白质(包括细胞质蛋白质和膜结合蛋白质)进行组特异性富集。
 
提取/上样buffer中含有非离子型去污剂用于提取胞内蛋白质,洗涤buffer和洗脱buffer不含去污剂。如果需要,可以使用pH9.0的buffer洗脱磷酸化蛋白质,这对有些类型的下游应用更加合适。。
 
小体积洗脱液的微量蛋白质纯化
试剂盒中的磁珠是以5%悬液的形式提供的,已经证实每ml悬液可结合400 μg的α-酪蛋白。磁珠的用量需要根据起始样品的浓度进行调节,富集的磷酸化蛋白质可以通过小体积的洗脱液(50-200 μg)洗脱,以便获得较高浓度的产物。
 
对磷酸化蛋白质的高选择性
在细胞的所有蛋白质中,只有少部分蛋白质会被磷酸化,因此在进行研究之前对磷酸化蛋白质进行富集是非常有必要的。TALON® PMAC Magnetic Phospho Enrichment Kit可用于任何种类的哺乳动物或组织样品,实际得到的磷酸化蛋白质的产量根据细胞系的不同而不同。
 
■ 产品特点
· 用于微量磷酸化蛋白质纯化的金属亲和方法,操作简单
· 可以从任意种类的细胞或组织样品中简便快速的进行富集操作
· 非变性的实验条件维持了蛋白质的构象和溶解性
· 洗脱得到的产物是小体积应用的理想选择
 
■ 应用
提取和富集所有种类的磷酸化蛋白质
 
■ 实验例
使用TALON PMAC Magnetic Phospho Enrichment Kit可以高效富集磷酸化蛋白质。使用含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂(10 mM氟化钠)的提取/上样buffer从HEK 293细胞中提取蛋白质,然后与200 μl的磁珠混悬液室温混合30 min,洗涤、洗脱。将各组分电泳并使用对应的磷酸化蛋白质特异性抗体(图A是AKT (Ser 473),图B是P-AKT (Thr 308) ,图C是P-PTEN (Ser 380) ,图D是P-GSK3 beta (Ser 9))做Western Blotting检测,Lane1是提取产物,Lane2是流穿液,Lane3是洗脱液。图D的51 kDa条带是由于抗体与P-GSK3a交叉反应的结果。
 
 
产品详情请点击以下链接:
https://www.takarabio.com/products/protein-research/purification-products/phosphoprotein-purification/phosphoprotein-magnetic-kit?catalog=635641