s1.FH11

实验室常用试剂、缓冲液的配制方法

1 M Tris-HCl

(pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度

配制量

配制方法

1 M Tris-HCl

1 L

1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温

度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 M Tris-HCl

(pH8.8)

组份浓度

配制量

配制方法

1.5 M Tris-HCl

1 L

1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温

度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

10×TE Buffer

(pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度

配制量

配制方法

100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

1 L

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

3 M 醋酸钠

(pH5.2)

组份浓度

配制量

配制方法

PBS Buffer

组份浓度

配制量

配制方法

137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

1 L

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

10 M 醋酸铵

组份浓度

配制量

配制方法

10 M 醋酸铵

100 ml

1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。

4. 密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚

配制方法

1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但

有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作

均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡

使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下

放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。

② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完

全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。

③ 加入等体积的1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层

后，除去上层水相。

④ 重复操作步骤③。

⑤ 加入等体积的0.1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分

层后，除去上层水相。

⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇

(25 : 24 : 1)

配制方法

1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白

质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻

璃瓶中4℃保存。

10% (W/V) SDS

2 N NaOH

组份浓度

配制量

配制方法

2 N NaOH

100 ml

1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻

璃烧杯炸裂)。

2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。

4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

2.5 N HCl

组份浓度

配制量

配制方法

2.5 N HCl

100 ml

1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。

2. 室温保存。

5 M NaCl

组份浓度

配制量

配制方法

5 M NaCl

1 L

1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

20% (W/V) Glucose

组份浓度

配制量

配制方法

20% (W/V) Glucose

100 ml

1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

Solution I

(质粒提取用)

组份浓度

配制量

配制方法

25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

1 L

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

2. 高温高压灭菌后，4℃保存。

3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。

Solution II

(质粒提取用)

组份浓度

配制量

配制方法

Solution III

(质粒提取用)

组份浓度

配制量

配制方法

3 M KOAc, 5 M CH3COOH

500 ml

1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。

4. 高温高压灭菌后，4℃保存。

0.5 M EDTA

(pH8.0)

组份浓度

配制量

配制方法

0.5 M EDTA

1 L

1. 称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。

注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L。

5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。

6. 室温保存。

1 M DTT

组份浓度

配制量

配制方法

1 M DTT

20 ml

1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。

10 mM ATP

组份浓度

配制量

配制方法

10 mM ATP

20 ml

1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。