核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

50×TAE Buffer

(pH8.5)

组份浓度

配制量

配制方法

2 M Tris-醋酸, 100 mM EDTA

1 L

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 加入57.1 ml的醋酸，充分搅拌。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。

10×TBE Buffer

(pH8.3)

组份浓度

配制量

配制方法

10×MOPS Buffer

组份浓度

配制量

配制方法

200 mM MOPS, 20 mM NaOAc, 10 mM EDTA

1 L

1. 称量41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。

2. 加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。

3. 使用2 N NaOH调节pH值至7.0。

4. 再向溶液中加入下列试剂。

5. 用DEPC处理水将溶液定容至1 L。

6. 用0.45 mm滤膜过滤除去杂质。

7. 室温避光保存。

注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。

组份浓度

配制量

配制方法

10 mg/ml 溴乙锭

100 ml

1. 称量1 g 溴乙锭，加入到100 ml容器中。

2. 加入去离子水100 ml，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。

3. 将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。

4. 溴乙锭的工作浓度为0.5 �mg/ml。

注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。

配制方法

1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是0.5×TBE或1×TAE)。

2. 根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。

3. 加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。

注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。

4. 在锥形瓶的瓶口上盖上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热溶解琼脂糖。加热

时,当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥形瓶，使琼脂糖充分均匀溶解。此操作重复数次，直至琼脂糖完全溶解。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。溶解琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电泳图像模糊不清。

5. 使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液（终浓度0.5 mg/ml),并充分混匀。

注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。

6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3 ~ 5 mm之间。

7. 在室温下使胶凝固（大约30分钟 ~ 1小时)，然后放置于电泳槽中进行电泳。

注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存2～5天。

琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围

6×Loading Buffer

(DNA电泳用)

组份浓度

配制量

配制方法

10×Loading Buffer

(RNA电泳用)

组份浓度

配制量

配制方法

10 ml

1. 称量下列试剂，置于10 ml离心管中。

2. 向离心管中加入约4 ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。

3. 加入5 ml的甘油（Glycerol）后，充分混匀。

4. 用DEPC处理水定容至10 ml后，室温保存。