核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法

20×SSC

组份浓度

配制量

配制方法

3.0 M NaCl, 0.3 M 柠檬酸钠

1 L

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加14 N HCl，调节pH值至7.0后，加去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

20×SSPE Buffer

组份浓度

配制量

配制方法

3.0 M NaCl, 0.2 M NaH2PO4, 0.02 M EDTA

1 L

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 加NaOH调节pH值至7.4（约6.5 ml的10 N NaOH)。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

50×Denhardt's溶液

500 ml

1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

2. 加去离子水约400 ml，充分搅拌溶解

3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。

4. 用0.45 mm滤膜过滤后，分装成每份25 ml。

5. -20℃保存。

组份浓度

配制量

配制方法

0.5 M Na2HPO4

1 L

1. 称量134 g Na2HPO4·7H2O置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水充分搅拌溶解。

3. 加入85%的H3PO4（浓磷酸）调节溶液pH值至7.2。

4. 加去离子水定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

组份浓度

配制量

配制方法

10 mg/ml Salmon DNA

约100 ml

1. 称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。

2. 用磁力搅拌器室温搅拌2～4小时，溶解后加入4 ml的5 M NaCl，使其终浓度为0.1 M。

3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。

4. 回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以切断DNA。

5. 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。

6. 离心回收DNA后，溶解于100 ml的去离子水中，测定溶液的OD260值。

7. 计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。

8. 煮沸10分钟后，分装成小份（1 ml/份)。-20℃保存。

9. 使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却。

组份浓度

配制量

配制方法

100 ml

1.称量下列试剂，置于200 ml烧杯中。

2.充分混匀后，使用0.45 mm滤膜滤去杂质后使用。

100 ml

1. 称量下列试剂，置于200 ml烧杯中。

2. 充分混匀后，使用0.45 mm滤膜滤去杂质后使用。

组份浓度

配制量

配制方法

39 mM Glycine, 48 mM Tris, 0.037% (W/V) SDS, 20% (V/V) 甲醇

1 L

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至800 ml后，加入200 ml的甲醇。

4. 室温保存。

组份浓度

配制量

配制方法

20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 0.05%（V/V）Tween 20

1 L

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 加入0.5 ml Tween 20后充分混匀。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，4℃保存。

组份浓度

配制量

配制方法

5%（W/V）脱脂奶粉/TBST Buffer

100 ml

1. 称量5 g脱脂奶粉加入到100 ml的TBST Buffer中，充分搅拌溶解。

2. 4℃保存待用（本封闭液应该现配现用)。