From Total RNA

OligotexTM-dT30<Super> mRNA Purification Kit

D9086

20次

2,000 元

本试剂盒是从Total RNA中分离纯化高纯度Poly(A)+ mRNA的试剂盒。OligotexTM-dT30<Super>是在Latex颗粒表面结合了Oligo (dT)30的5'端，对热和碱非常稳定。Latex颗粒表面积大，悬浮性好，被固定的Oligo (dT)30能迅速高效地与Total RNA溶液中的Poly(A)+ mRNA结合，

形成mRNA -OligotexTM-dT30复合体，利用Spin Column可从mRNA-OligotexTM-dT30复合体上简便快速地回收高纯度的mRNA 。

本公司利用本试剂盒从250 mg人HT29细胞Total RNA (混有基因组DNA) 中回收到了7 mg

的高纯度mRNA。

注意事项

以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前请一定认真阅读。

● 为了防止树脂凝集，请将OligotexTM-dT30<Super>用Pippet充分混匀后使用。

● 请避免在强酸条件下使用本试剂盒。

● 长时间冷藏保存时，Latex颗粒易产生沉淀。使用时请在37℃水浴中保温，并用移液枪充分混匀悬浮后使用。不能用Vortex等激烈混合。

● 提取液中mRNA量较少时，由于残留试剂的影响，有可能不能准确进行UV测定，此时请对样品进行苯酚/氯仿抽提以除去残留试剂。

保存

4℃ (OligotexTM-dT30<Super>不能冻结)。

图1 实验操作流程图

Protocol

操作方法

操作流程见图1，详细操作如下。全套操作约为30分钟。

1. 将OligotexTM-dT30<Super>于37℃保温。2×Binding Buffer有沉淀析出时，请于37℃完

全溶解后使用。

2. 在1.5 ml Microtube中按以下方法配制反应液。

实验操作程序

* 按表中要求，使用DEPC H2O制备适当的RNA水溶液。

3. 将上述配制的反应液充分混匀后，70℃加热3分钟（RNA变性)。

4. 室温放置10分钟（OligotexTM-dT30 和mRNA结合）。

5. 室温15,000 rpm离心5分钟。

6. 除去上清（尽量不要吸入OligotexTM-dT30 )，加入350 ml的Wash Buffer，将OligotexTM-

dT30 充分悬浮后，加入到Spin Column Set的Column Cup中。

7. 室温15,000 rpm离心30秒钟。

8. 向Column Cup中加入350 ml的Wash Buffer，使OligotexTM-dT30 充分悬浮后，将Spin

Column移至新的Spin Column用离心Tube上。

9. 室温15,000 rpm离心30秒钟。

10. 将Spin Column移至新的Spin Column用离心Tube上。

11. 向Column Cup中加入20~50 ml 70℃预热的DEPC H2O，充分悬浮OligotexTM-dT30 。

室温15,000 rpm离心30秒种，回收mRNA。

12. 反复操作上述步骤11. 2~3次（每次都应加入70℃预热的DEPC H2O）。

Application

使用本试剂盒，按照上述“操作方法”，从Hela细胞的Total RNA (150 mg/150 ml) 中纯化mRNA，进行1%琼脂糖凝胶电泳，电泳结果如下图。

实验例