TaKaRa PCR Amplification Kit

DR011

200 次

500 元

制品说明

PCR（Polymerase Chain Reaction）法是一种体外快速扩增DNA的简单而有效的方法。在现代分子生物学研究中，PCR法广泛应用于DNA的扩增、DNA重组、基因克隆以及DNA测序等多种领域。

本试剂盒中含有PCR扩增用的多种高质量的试剂，配置合理，使用方便。根据各科研人员的要求，调节使用这些试剂，可得到最佳的PCR反应结果。

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Control Primer序列

Control Primer 1: 5'-GATGAGTTCGTGTCCGTACAACT-3'

Control Primer 2: 5'-CCACATCCATACCGGGTTTCAC-3'

Control Primer 3: 5'-GGTTATCGAAATCAGCCACAGCGCC-3'

* 使用Control Primer 1、2时，可以扩增Control Template的6,012 bp DNA片段。

使用Control Primer 1、3时，可以扩增Control Template的500 bp DNA片段。

Limited Use Label License: [P1]

Protocol

本试剂盒中含有进行Control 反应的lDNA以及扩增lDNA的6,012 bp和500 bp目的片段的引物。实验操作如下。

1. 按下列组成配制PCR反应液。

使用Control Template DNA时的PCR扩增

* 根据需要，可使用10×PCR Buffer (-) (Mg2+ Free) 和MgCl2溶液，调整Mg2+浓度。

2. 按以下条件进行PCR反应。

3. 反应结束后，取5～10 ml反应液进行1%的琼脂糖凝胶电泳。电泳结果见图1。

图1 PCR扩增电泳图

Application

1. (2. (3.

以l DNA为模板，扩增4 kbp、6 kbp及9 kbp的DNA片段。

反应液组成、PCR条件参照Protocol，但扩增9 kbp时Extension时间为6 min。

结果见图2，可以很好地扩增目的DNA片段。

l DNA的扩增

图2 PCR扩增电泳图

Note

● 试剂盒中的各组份，要仔细混匀后使用，但TaKaRa Taq要避免剧烈操作。

● 样品DNA中如有蛋白酶污染时，可在最初的热变性步骤（Denaturation Step）之后加入

TaKaRa Taq。目的是通过热处理使蛋白酶失活，防止TaKaRa Taq的分解。

● 因为样品DNA的提取方法不同，10×PCR Buffer (+) (Mg2+ Plus) 中的Mg2+浓度可能并非

最适浓度，此时可使用10×PCR Buffer(-）(Mg2+ Free)，调整PCR反应液的最佳Mg2+浓度。

● 模板DNA的推荐使用量。

使用注意

Saiki, R. K., Gelfand, D. H., Stoffel, S., Scharf, S. J., Higuchi, R., Horn, G. T., Mullis, K.

B. and Erlich, H. A. (1988) Science 239, 487-491.

Scharf, S. J., Horn, G. T. and Erlich, H. A. (1986) Science 233, 1076-1078.

Gyllensten, U. B. and Erlich, H. A. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 7652-7656.

Kawasaki, E. S., Clark, S. C., Coyne, M. Y., Smith, S. D., Champlin, R., Whitte, O. N.

and McCormick, F. P. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 5698-5702.

Lawyer, F. C., Stoffel, S., Saiki, R. K., Myambo, K. B., Drummomd, R. and Gelfand, D.

H. (1989) J. Biol. Chem. 264, 6427-6437.