cDNA PCR Library Kit

D6119

20 次

900 元

制品说明

PCR（Polymerase Chain Reaction）是用两种引物特异性地扩增目的DNA片段的反应。用PCR法只能扩增DNA，RNA不能直接作为模板被扩增，当使用反转录酶把RNA合成cDNA后，便可使用PCR法对RNA进行解析。现在，通过RT-PCR法进行RNA的解析、cDNA的克隆及RNA水平的表达解析等实验已被广泛应用。但是，当从微量的RNA起始进行RT-PCR反应时，有时难以得到理想的结果。本制品是可以对微量RNA进行PCR扩增的试剂盒, 并且PCR的扩增灵敏度极高。

本制品需要与合成双链cDNA的试剂盒［M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit（TaKaRa Code: D6130)] 以及TaKaRa Taq、TaKaRa Taq Hot Start Version、TaKaRa Ex Taq、TaKaRa Ex Taq Hot Start Version、TaKaRa LA Taq或TaKaRa LA Taq Hot Start Version配合使用。

Primer及Cassette Adaptor的序列

cDNA PCR Library的制作原理

首先，使用Oligo dT-RA Primer进行反转录反应，再使用M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit合成具有平滑末端的双链cDNA。把CA Cassette Adaptor与双链cDNA连接，此时由于CA Cassette Adaptor的短链3' 末端为氨基修饰，不能向下延伸。并且CA Primer的序列设计成CA Cassette Adaptor单链部分的一部分，在对和CA Cassette Adaptor连接以后的cDNA进行PCR扩增时， 只用CA Primer是不能进行扩增反应的，必须先由RA Primer开始进行延伸反应，而CA Primer能和由RA Primer的延伸产物相结合，从而使用CA Primer和RA Primer可以进行PCR扩增反应（见下图)。结果可以扩增全长的Poly(A)+ RNA，制作cDNA PCR Library。

Application

从Human K562培养细胞Total RNA起始，按标准操作程序制作成cDNA PCR Library，然后以此为模板，扩增b-actin（275 bp)，b2 microglobulin（b2m：120 bp)，Hypoxanthine phosphribosyltransferase（HPRT：344 bp）的cDNA。

对Human K562细胞的

全RNA的PCR扩增

PCR反应液组成

PCR反应条件

结果