Real Time PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光物质，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，对未知模板进行定量分析的方法。因其无需电泳，且具有快速性及定量性而倍受青睐。 本公司承接利用Real Time PCR法进行课题研究的技术服务，可从引物设计合成开始，至Real Time PCR反应检测的一条龙技术服务，欢迎惠顾！

【服务项目】

● 定性分析（SNP分型解析等）

● 绝对定量

● 相对定量（mRNA表达量分析）

● DNA Microarray数据确认

● RNAi效果确认（siRNA的筛选）

【检测方法】

SYBR(R) Green I嵌合荧光法，TaqMan(R) 探针法，Cycling探针法。

【Real Time PCR装置】

使用本公司Thermal Cycler Dice(R) Real Time System和美国Cepheid公司的Smart Cycler(R) II System为主的多种Real Time PCR装置。

服务项目说明

● 定性分析

PCR反应结束后的PCR产物无需电泳检测，可以通过Real Time PCR方法，简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测，同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。本技术可以广泛应用于病毒、病原菌等致病微生物的检测以及各种生物品种的鉴定等。

● 绝对定量

绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作5个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量（起始拷贝数）分析。

● 相对定量（mRNA表达量分析）

基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene， 如：GAPDH、b-actin等。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。

服务要求

● 请认真填写Real Time PCR检测技术服务委托单

委托单在本商品目录F36页上拷贝或在网上（http：//www.takara.com.cn）下载获得。

● 进行mRNA表达量分析时，请寄送足量的并且保证纯度的Total RNA（浓度在500 ng/ml以上，体积在

20 ml以上)。如果目的基因表达量低时，应尽量提供更高浓度的Total RNA。

● 如果提供的材料为细胞或组织，DNA、RNA的提取费用另收。同时应保证材料新鲜，动物细胞数为106以

上，动物组织为100 mg以上。

服务项目示例

以相对定量为例。

● 引物设计合成

具体情况请参见本商品目录F37 ~ F39页“Real Time PCR用引物设计合成服务”部分内容。

● 制作标准曲线

使用设计合成的引物，以客户提供的Total RNA样品为模板，进行Real Time PCR反应，确认引物模板的反应性能。然后将模板进行5个浓度梯度稀释，制作标准曲线，以供进一步定量分析使用。

● Real Time PCR反应及定量分析

对客户提供的RNA Sample，进行Real Time RT-PCR反应，并进行定量分析。用相对定量方法进行定量分析时，要对管家基因等参比基因进行同样操作，用所得到的值进行RNA量的校正，最后求得目的基因的相对表达量。

价格·交货期

【报价说明】

● 以上技术服务报价是针对采用SYBR Green I 嵌合荧光法的报价。如果是采用TaqMan探针或Cycling探针

方法时，价格请具体垂询!

● 以上技术服务报价是以提纯的核酸（即：DNA或RNA）为起始材料设定的，如果需要进行核酸纯化时，费

用另计。

● 相对定量检测时，若客户要求构建RNA标准品或因客户提供的Total RNA不能作为标准品时，构建RNA标

准品的费用另记。价格请具体垂询！

● 以上技术服务报价为1个目的基因的报价。进行相对定量分析时同一材料的2个目的基因的价格=1个目的基

因价格×1.5；3个目的基因的价格=1个目的基因价格×2。

● 如因实验材料等非本公司原因造成某实验步骤失败，使实验提前终止，已启动的实验项目仍正常收费。