SARS病毒RT-PCR检测试剂盒

TaKaRa SARS Virus RNA Detection Kit

D303

50 次

2,000 元

制品说明

本试剂盒是用于检测SARS病毒RNA的RT-PCR试剂盒。试剂盒采用了One Step RT-PCR法和Nested PCR法相结合的方法，定性检测SARS病毒基因。由RNA→cDNA合成→PCR反应操作在同一反应体系中进行，反应中途不需添加任何试剂，便可完成由AMV(Avian Myeloblastosis Virus）来源的反转录酶将RNA反转录为cDNA，再由AMV-Optimized Taq（根据TaKaRa LA PCR技术研制）扩增cDNA的全部反应。试剂盒中附加了内对照RNA(Internal Control RNA)，用以内对照实验及阳性对照实验，可以防止假阳性、假阴性的出现。本试剂盒的One Step RT-PCR法可以检测104 copies的SARS病毒RNA；而进一步进行Nested PCR则可以检测102 copies的SARS病毒RNA。实验证明，本试剂盒检测性能良好，准确率高，具有广泛的应用价值。

各种引物序列

SARS RNA及Internal Control RNA扩增片段大小区别

Protocol

1. 按下列组份配制RT-PCR反应液。

1. One Step RT-PCR反应

* Positive Control反应时加入Internal Control RNA原液，不加样品RNA。

Negative Control反应时不加样品RNA和Internal Control RNA。

2. 按下列条件进行RT-PCR反应。

3. 反应结束后，取10 ml PCR反应液进行3%琼脂糖凝胶电泳，确认PCR扩增产物。如样品

RNA检测出195 bp目的片段，可判定为阳性结果；如未检测出195 bp目的片段，可继续进行Nested PCR反应。

2. Nested PCR反应

1. 按下列组份配制Nested PCR反应液。

2. 按下列条件进行PCR反应。

3. 反应结束后，取10 ml PCR反应液进行3%琼脂糖凝胶电泳，确认PCR扩增产物。

3. 电泳结果图例及结果判定法

说明：One Step RT-PCR扩增的电泳图像显示，在50 bp以下位置出现电泳带，这是由于引物间形成的

引物二聚体（Primer dimer）的结果。

【如果出现下列电泳结果时，可以作出如下判断】

问答

由于本试剂盒的PCR扩增性能较强，易形成一些非特异扩增。在进行结果判断时可以不予考虑，不影响特异性PCR扩增反应。

Internal Control RNA为本公司独自设计构建的RNA，其特点为使用1st Primer Pair和2nd Primer Pair时，与SARS RNA一样都有目的DNA片段的扩增，但片段大小不同，所以可以和实验样品一起添加到反应液中，起到监控实验样品质量及RT-PCR及Nested PCR是否顺利进行的作用。同时，它与SARS RNA进行竞争反应，从不同的目的片段扩增强弱对比的分析，可以起到对SARS RNA的粗定量作用。但Internal Control RNA原液直接与实验样品一起添加到反应液中时，竞争的结果会使Internal Control RNA有很强的目的DNA片段扩增，而抑制了SARS RNA的扩增，使检测灵敏度下降。所以在竞争反应时，须将Internal Control RNA稀释1,000倍后使用。稀释1,000倍后的Internal Control RNA在One Step RT-PCR反应时，由于模板量较少， 无法看到PCR扩增条带，在Nested PCR反应时，显示300 bp DNA扩增条带。

不可以。与1st Primer Pair相比，2nd Primer Pair直接进行One Step RT-PCR反应时的特异性较低，不推荐使用。