TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set

D6601

100 次

1,400 元

制品说明

本制品是通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中支原体的Primer Sets。常规培养法进行支原体检出需要一周时间，使用本Kit通过PCR扩增及电泳分析进行支原体检出只需数个小时，操作方便简单。使用本Kit能检出培养细胞中至少11种支原体（M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. salivarium, M. hominis, M. pulmonis, M. arthritidis, M. neurolyticum, M. hyopneumoniae, M. capricolum）以及尿素原体（UreaPlasma）属中的1种（U. urealyticum）。本Kit如果与TaKaRa Taq（TaKaRa Code: DR001）或TaKaRa Ex Taq（TaKaRa Code: DRR001）一起使用，可以获得最佳的扩增效果。

PCR方法检测Mycoplasma

原理

原核生物的rRNA碱基序列非常保守，而rRNA操纵子上编码rRNA的DNA间隔区如16S和23S间隔区，各种生物种间的碱基序列差别很大。这个间隔区的DNA序列及长度在Mycoplasma各个种间既有相对保守的部分，也有具有很大差异的部分。本制品是在编码16S和23S rRNA的DNA上设计一对F1/R1引物，扩增编码16S和23S rRNA的DNA间隔区， 然后在编码16S和23S rRNA的DNA间隔区的保守区上设计一条F2引物，在编码23S rRNA的DNA上设计一条R2引物进行套式PCR。此反应体系只特异性扩增Mycoplasma DNA，检出灵敏度与特异性都很高。

图1 PCR法检测Mycoplasma原理

Application

培养11种支原体和1种尿素原体，提取DNA后稀释成1 ng/ml。另取Human DNA和Mouse DNA 1 ng作为模板，进行PCR反应。

1. 1st PCR。

① 按下列组份配制PCR反应液。

实验例

② 按下列条件进行PCR反应:

2. 2nd PCR。

① 按下列组份配制PCR反应液。

② 按下列条件进行PCR反应:

3. 反应结束后，取10 ml的PCR反应液进行3%琼脂糖凝胶电泳，确认PCR扩增产物。

4. 结果分析。

1st PCR反应时，支原体检出界限M. capricolum为1 ng、U. urealyticum为100 pg、其他支原体检出界限是10 pg。Human DNA和Mouse DNA使用量在100 ng时有非特异性片段产生。

2nd PCR时，支原体检出界限M. capricolum和M. hyopneumoniae为100 fg、其他支原体检出界限是10 fg。Human DNA和Mouse DNA使用量在100 ng时无非特异性片段产生。

各种支原体扩增片段大小