Real Time PCR Ovine DNA Detection Kit

D319

50 次

2,000 元

制品说明

本制品是利用Real Time PCR技术快速检测羊（绵羊和山羊）基因组DNA的试剂盒。采用TaqMan探针法，根据线粒体DNA Cytochrome C oxidase subunit I（COX I）基因上动物种间多态性的差异进行羊源性成分鉴定。应用多色荧光检测技术，对反应液中含有的两种不同荧光染料进行双通道同步检测，在同一反应管内对羊的COX I基因及内参照（Internal Control）同时进行扩增，并通过标记两种不同荧光物质（FAM、HEX）的特异性探针进行特异性杂交，实现多色荧光同步检测。其中对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。制品中2×Premix for Ovine已经将DNA聚合酶、反应用Buffer、dNTP等试剂预混在一起。进行实验时，PCR反应液的配制十分简单。PCR反应用DNA聚合酶使用了Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，与TaKaRa精心研制的Real Time PCR用Buffer组合使用，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高了PCR的扩增效率。

本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高、特异性强。本制品适用于食品、化妆品和饲料等样品中羊（绵羊和山羊）源性成分的鉴别。

适用的Real Time PCR扩增仪

ABI PRISM7000/7700/7900HT，7300/7500 Real-Time PCR System，7500 Fast Real-Time PCR System（Applied Biosystems）

LightCycler(R)（Roche Diagnostics）

Smart Cycler(R) System（Cepheid）

Mx3000P（Stratagene）

其他各种多通道检出Real Time PCR扩增仪

探针标记

Control DNA for Ovine及Internal Control DNA扩增片段大小

Application

1. 按下列组份配制PCR反应液。

实验例

* Negative Control反应时，用dH2O替代样品DNA；

Positive Control反应时，用Control DNA for Ovine替代样品DNA。

2. 按下列条件进行PCR反应:

* 使用仪器不同，设定时间不同。使用Applied Biosystems公司Real Time PCR扩增仪时必须根据仪

器型号设定不同时间。7700/7900HT 设定为30秒，7000/7300设定为31秒，7500设定为34秒，7500 Fast设定为25秒。使用Roche Diagnostics公司LightCycler(R)、Cepheid公司Smart Cycler(R)及Stratagene公司Mx3000P Real Time PCR扩增仪时设定为20秒。其它仪器设定时间根据仪器使用说明在20～30 sec范围内进行调整。

3. 结果（Negative Control和Positive Control反应结果)。

以ABI PRISM 7300反应结果为例。

4. 结果分析。

请参见“结果判定”部分。

结果判定

为确保检测结果的准确性，在进行实验样品检测时，请务必进行Negative Control实验和Positive Control实验。

1. Negative Control实验。

在配制Real Time PCR反应液时，用dH2O替代检测样品。对各种实验结果的判定情况说明见下表。

2. Positive Control实验。

在配制Real Time PCR反应液时，用Control DNA for Ovine 替代检测样品。对各种实验结果的判定情况说明见下表：

3. 实验样品的检测。

对各种实验结果的判定情况说明见下表。