TaKaRa HBV DNA Detection Kit

D302

100 次

1,000 元

制品说明

本制品的原理是用PCR法特异性扩增乙肝病毒 (HBV) DNA的S基因，以达到检测HBV的目的。本试剂盒采用套式PCR法 (Nested PCR)，所以具有检出灵敏度高、特异性强等特点。如果进一步对PCR扩增产物直接进行DNA测序 (Direct Sequencing), 还可以了解各种HBV的亚型，对乙肝病毒的进一步深入研究和诊断提供更详尽的数据。此外，通过大量实验证明, 本试剂盒还能对HBV进行粗定量。

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-20℃

A. 标本处理

1. (2.

将20 ml血清和20 ml Lysis Buffer在1.5 ml Microtube中混匀，100℃煮沸10分钟。

室温下离心 (12,000 rpm、10分钟)，取2 ml上清液作为1st PCR模板。

B. 1st PCR反应

在PCR反应管中加入2×PCR Premix 12.5 ml，再向此反应管中加入2 ml已处理好的标本和

10.5 ml Primer Pair 1，按以下条件进行1st PCR反应：

C. 2nd PCR反应

在PCR反应管中加入2×PCR Premix 12.5 ml，再向此反应管中加入2 ml 1st PCR反应液和

10.5 ml Primer Pair 2，按以下条件进行2nd PCR反应：

D. 结果分析

把1st PCR反应液及2nd PCR反应液5 ~ 10 ml用2%琼脂糖凝胶进行电泳。如果1st PCR反应液在510 bp附近有DNA亮带，则此标本可判定为阳性 (相当于HBVsAg、HBVeAg阳性)； 如果1st PCR反应液在510 bp附近没有DNA亮带，而2nd PCR反应液在230 bp附近有DNA亮带，则此标本也可判定为阳性 (相当于HBVsAg阳性)；如果2nd PCR反应液在230 bp附

近也没有DNA亮带，则此标本可以判定为阴性 (见图1)。

图1 PCR结果图例