RNA Marker RL10,000

D523A

约20 次

200 元

D523B (A×5)

约100 次

950 元

D523C (A×10)

约200 次

1,800 元

制品说明

RNA Marker RL10,000是由体外转录得到的8条高纯度RNA片段组成的，其长度分别为10 kb、6 kb、5 kb、4 kb、3 kb、2 kb、1 kb和0.5 kb, 每微升本制品的RNA量约为500 ng。可用于RNA的琼脂糖变性凝胶电泳（甲醛或乙二醛）或者普通的RNA琼脂糖凝胶电泳等。每次取1 ml电泳时可使用约20次。

3%的琼脂糖凝胶电泳（使用1×TAE Buffer）时电泳图

RNA Markers的使用方法：

(适用于RNA Marker RL1,000、RL6,000、

RL10,000）

RNA Marker ( RL1,000; RL6,000; RL10,000) 可以进行一般琼脂糖凝胶电泳和变性琼脂糖凝胶电泳，以RL10,000为例，具体使用方法如下：

普通琼脂糖凝胶电泳时

1.

按下列组份配置RNA Marker样品。

均匀混合后65℃加热10分钟，迅速冷却至室温（最好用PCR仪)。

使用高质量的琼脂糖，用1×TAE Buffer制备3%凝胶*，制胶时凝胶中请加入溴乙锭 (最终浓度：1 mg/ml)。

将上述操作2配制的Marker样品加样后，在1×TAE Buffer中电泳。

* RL6,000; RL10,000使用3%凝胶，RL1,000需使用5%凝胶。

1.

称量20.9 g MOPS置于1 L烧杯中。

加入约700 ml的DEPC处理水，搅拌溶解。

使用2 N NaOH调节pH值至7.0。

向上述溶液中加入10 ml的1 M CH3COONa（DEPC处理水配制)。

溶液中加入10 ml的0.5 M EDTA pH8.0（DEPC处理水配制)。

DEPC处理水将上述溶液定容至1 L。

使用0.45 mm滤膜过滤后室温避光保存。

2.

按下列组份配制RNA Marker样品。

均匀混合后，70℃加热5分钟，迅速冷却至室温（最好用PCR仪)。

甲醛变性琼脂糖凝胶配制如下*：制胶时加3 g高质量的琼脂糖到93 ml DEPC水中，另加30 ml 5×MOPS-EDTA。煮沸直至完全溶解。加入DEPC水定容至123 ml。让溶液冷却至60℃左右后，加入27 ml 37%甲醛（在通风橱中操作）倒胶后于室温静置1小 时。

加样前将胶在1×MOPS-EDTA中预电泳30分钟。

混匀电泳槽中的1×MOPS-EDTA Buffer（电泳液)，加入上述操作2配制的RNA Marker 样品后，10 V/cm（恒压）条件下电泳1小时左右，此时应每隔30分钟混匀电泳槽中的电泳液一次。

电泳结束后，将凝胶在DEPC处理水中浸泡15分钟，除去凝胶中的甲醛。

使用DEPC处理水制备的EtBr（5 mg/ml）染色2 ~ 3分钟。用DEPC处理水脱色30分钟，再换水脱色30分钟后成像观察。如果背景偏高时可以进一步将凝胶脱色。

* RL6,000; RL10,000使用3 g琼脂糖胶粉，RL1,000使用6 g琼脂糖胶粉。

注意：甲醛凝胶用EtBr染色较为困难，即使RNA样品染上了明显的条带也会带来较高的背景。因此，应控制凝胶在染色剂中的浸泡时间小于5分钟，以降低背景。

Note

RNA极易分解，应严格防止核酸分解酶的混入。实验操作时应戴手套，实验的仪器及溶液应经DEPC处理。操作不严禁会造成RNA降解，导致RNA Marker中的条带不清晰或不完整。

RNA Marker中的RNA为单链线性RNA，因此，当进行体外转录得到的RNA、或经提取得到的mRNA等单链线性RNA电泳时，可使用本制品作为分子量大小的参照标准,但对于Total RNA, 本Marker只能作为定性参照标准。

若脱色后观察不到Marker的条带，可能是由于胶被染上了较高的背景，此时可以进行反复脱色后再进行观察。

使用注意