Poly(A) Tailed RNA Marker RL10,000

D524A

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制品说明

Poly(A) Tailed RNA Marker RL10,000是由体外转录得到的6条高纯度的Poly(A) Tailed单链RNA组合而成的，其长度分别为10 kb、6 kb、4 kb、2 kb、1 kb和0.5 kb，每微升本制品的RNA量约为1 mg，可用于RNA的琼脂糖变性凝胶电泳（甲醛或乙二醛）。由于本制品中的每条RNA的3' 端都有30个A碱基，所以也可以用于cDNA合成时的Control模板。

保存温度 -80℃（短期保存可放置于-20℃）

使用方法

【甲醛变性琼脂糖凝胶电泳】

1.

按下列方法配制5×MOPS-EDTA Buffer (0.1 M MOPS pH7.0,5 mM EDTA,10 mM NaOAc)。

① 称量20.9 g MOPS置于1 L烧杯中。

② 加入约700 ml的DEPC处理水，搅拌溶解。

③ 使用2 N NaOH调节pH值至7.0。

④ 向上述溶液中加入10 ml的1 M NaOAc（DEPC处理水配制)。

⑤ 向溶液中加入10 ml的0.5 M EDTA pH8.0（DEPC处理水配制)。

⑥ 用DEPC处理水将上述溶液定容至1 L。

⑦ 使用0.45 mm滤膜过滤后室温避光保存。

2.

按下列组份配制RNA Marker样品。

均匀混合后，70℃加热5分钟，迅速冷却至室温（最好用PCR仪)。

甲醛变性琼脂糖凝胶配制方法如下（2%胶）：

加3.0 g高质量的琼脂糖到93 ml DEPC水中，煮沸直至完全溶解，再加入适量的DEPC水定容至93 ml 。溶液冷却至60 ℃左右后，加入30 ml 5×MOPS-EDTA Buffer和27 ml 37%甲醛（在通风橱中操作)，倒胶后于室温静置1小时。

加样前将胶在5×MOPS-EDTA Buffer中10 V/cm条件下预电泳10分钟。

混匀电泳槽中的5×MOPS-EDTA Buffer（电泳液），加入上述操作2配制的RNA Marker 样品后,10 V/cm（恒压）条件下电泳至溴酚蓝迁移至胶的2/3左右位置，电泳过程中应每隔30分钟混匀电泳槽中的电泳液一次。

电泳结束后，将凝胶在DEPC处理水中浸泡15分钟，除去凝胶中的甲醛。

使用DEPC处理水制备的EtBr (5 mg/ml) 染色2~3分钟。用DEPC处理水脱色30分钟，再换水脱色30分钟后成像观察。如果背景偏高时可以进一步将凝胶脱色。

注）甲醛凝胶使用EtBr染色比较麻烦，即使RNA样品染上了明显的条带也会带来较高的背景。因此，凝胶在染色剂中的浸泡时间应小于5分钟，以降低背景。

使用例

1. 取本制品3 ml进行2%的甲醛变性琼

脂糖凝胶电泳时的结果如下：

2. 取本制品2 ml，以Oligo (dT) 为反转录

引物，使用M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit (TaKaRa Code: D6130) 进行双链cDNA合成，结果如下：