制品说明

进行Real Time RT-PCR反应时，设计反应性能良好的PCR引物非常重要。本制品是人、小鼠、大鼠各管家基因（Housekeeping Gene）的Real Time RT-PCR用高特异性Primer Sets，可以用于SYBR Green I嵌合荧光染料法进行定量表达分析。应用本制品制作标准曲线具有PCR扩增效率高，线性关系良好，扩增产物单一等优点。

本制品适合于TaKaRa Thermal Cycler Dice(R) Real Time System、ABI PRISM 7000/7700/

7900HT、7300/7500 Real-Time PCR System、7500 Fast Real-Time PCR System、LightCycler(R)、Line-Gene、Smart Cycler(R)、Mx3000P等各种机种的Real Time PCR扩增仪。

各制品信息

Protocol

25 ml反应体系中添加0.5 ml（各5 pmol)。

使用方法

Application

使用试剂：TaKaRa SYBR(R) PrimeScriptTM RT-PCR Kit（Perfect Real Time)（TaKaRa

Code: DRR063）

Target： 以HL60 Total RNA为模板，使用Hs002引物进行PCR扩增，检测Human GAPDH

基因；

以Mouse Liver Total RNA为模板，使用Mm004引物进行PCR扩增，检测Mouse GAPDH基因;

以Rat Brain Total RNA为模板，使用Rn003引物进行PCR扩增，检测Rat ACTB基因。

实验例

Template：上述Total RNA（500 ng）经反转录反应后的cDNA溶液。

使用EASY Dilution将cDNA溶液按100，101，102，103，104，105梯度稀释(10倍梯度稀释）后，各取2 ml进行Real Time PCR反应。此时25 ml PCR反应液中的cDNA添加量分别相当于从100 ng，10 ng，1 ng，100 pg，10 pg，1 pg的Total RNA反转录得到的cDNA量。

使用仪器：Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System

检测方法：SYBR Green I嵌合荧光染料法

反应条件：Stage 1：预变性 Stage 2：PCR反应 Dissociation Stage

Reps：1 Reps：40

95℃ 10秒 95℃ 5秒

60℃ 31秒

1. 应用Real Time RT-PCR Primer（Hs002）进行PCR扩增，对Human GAPDH基因的检

测结果。

2. 应用Real Time RT-PCR Primer（Mm004）进行PCR扩增，对Mouse GAPDH基因的检

测结果。

3. 应用Real Time RT-PCR Primer（Rn003）引物进行PCR扩增，对Rat ACTB基因的检测

结果。

检测结果显示，应用上述引物均可以检测到相当于1 pg的Total RNA。对融解曲线分析可知，扩增产物非常单一；由标准曲线可以看出，PCR扩增效率较高，线性关系良好。