D103A

1.0 mg

500 元

D103B (A×5)

5.0 mg

2,125 元

D103C (A×10)

10.0 mg

4,000 元

pMD19-T Simple Vector

D104A

1.0 mg

500 元

D104B (A×5)

5.0 mg

2,125 元

D104C (A×10)

10.0 mg

4,000 元

制品说明

pMD18-T Simple Vector、pMD19-T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。这两种载体是分别由pUC18、pUC19载体改建而成，它消除了pUC18、pUC19载体上的多克隆酶切位点，再在pUC18、pUC19载体的多克隆酶切位点处导入了EcoR V

酶切位点，使用EcoR V进行酶切反应后，再在两侧的3'端添加 "T" 而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3'末端添加一个 "A" 的特性，所以使用这两种制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。

这两种载体尽管消除了LacZ基因上的多克隆酶切位点，但不影响b-半乳糖苷酶的正常表达，因此，PCR产物克隆后仍可以利用a-互补性进行蓝白菌落的筛选， 挑选阳性克隆。

由于这两种载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。

由于这两种载体是以pUC18、pUC19载体为基础构建而成，所以它们具有同pUC18、pUC19载体相同的功能。此外，这两种制品中的高效连接液Solution I可以在极短时间内 (约30分钟) 完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。制品中的Control Insert (500 bp) 还可以用于Control反应。

pMD19-T Simple Vector与pMD18-T Simple Vector 相比，pMD19-T Simple Vector的 b-半乳糖苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，菌落显示的蓝色更深。因此，克隆后更容易进行克隆体的蓝白筛选。

纯度

Control Insert克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNA片段。

Control Insert经克隆后，用双脱氧测序法确认T碱基的存在。

用途

进行TA克隆，克隆PCR产物。

对克隆后的PCR产物使用BcaBESTTM Sequencing Primers、M13 Primers进行DNA测序。

pMD18-T Simple Vector相关位点说明

pMD19-T Simple Vector相关位点说明

操作方法

加入5 ml（等量）的 Solution I。

16℃反应30分钟。

注 ①室温（25℃）也能正常进行连接反应，但反应效率稍微降低。

②5分钟也能正常进行连接反应，但反应效率稍微降低。

全量（10 ml）加入至100 ml JM109感受态细胞中冰中放置30分钟。

42℃加热45秒钟后，再在冰中放置1分钟。

加入890 ml SOC培养基，37℃振荡培养60分钟。

在含有X-Gal、IPTG、Amp的L-琼脂平板培养基上培养，形成单菌落。计数白色、 蓝色菌落。

挑选白色菌落，使用PCR法确认载体中插入片段的长度大小。

结果

使用Control Insert时的连接/转化结果如下，使用的感受态细胞的转化效率为：1.5×108 cfu/mg pUC19 DNA。

* 效率是指白色菌落中的目的DNA Insert片段的连入效率。