E. coli Competent Cells

HB101

D9051

1 Set (100 ml×10支)

300 元

JM109

D9052

1 Set (100 ml×10支)

300 元

DH5a

D9057

1 Set (100 ml×10支)

300 元

大肠杆菌经Ca2+处理后可摄取外源DNA (Plasmid、Phage DNA)，处于这种状态的细胞称作感受态细胞 (Competent Cells)。在基因重组实验时，要经常使用感受态细胞进行转化操作，但制作稳定高效的感受态细胞却又十分困难。尤其是在制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十分低的情况下，使用高效的感受态细胞显得十分重要。

TaKaRa对Hanahan的方法进行了改良，并制作出了高效的感受态细胞。

细胞种类

高效常用宿主E. coli HB101

E. coli HB101是基因重组实验起始时便十分常用的宿主菌。其遗传性能稳定，使用方便，适合于各种基因重组实验。

a-互补性选择宿主E. coli JM109

E. coli JM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM109 F'编码的lacZaM15相结合，从而显示b-半乳糖苷酶活性 (a-互补性)。利用这一特性, 可以很容易鉴别重组体菌株。因为具有F'质粒，除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外，也可作为M13载体DNA的宿主，制备单链DNA。

a-互补性选择宿主E. coli DH5a

E. coli DH5a在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和DH5a编码的lacZDM15相结合，从而显示b-半乳糖苷酶活性 (a-互补性)。利用这一特性, 可以很容易鉴别重组体菌株。DH5a可以用于制作基因库、进行亚克隆等。

由于DH5a具有deoR变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。

质量标准

使用1 ng的质粒DNA进行转化时：

100 ml Competent Cells/1 ng plasmid转化时产生的菌落数

>1×108 transformants/1 mg plasmid

b-半乳糖苷酶、a-互补性的确认

E. coli JM109:

对E. coli Competent Cells JM109使用pUC19 DNA进行转化后，在含有100 mg/ml 的Ampicillin、0.2 mM的IPTG，40 mg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落占总菌落数的1%以下。

E. coli DH5a:

对E.coli Competent Cells DH5a使用pUC19 DNA进行转化后，在含有100 mg/ml 的Ampicillin、40 mg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。

100 ml的E. coli Competent Cells在含有100 mg/ml的Ampicillin L-琼脂平板培养基上不产

生菌落。

1. Competent Cells使用前在冰中解冻。

2. 融解后，轻柔混合均匀，取100 ml的Competent Cells移入试管中 (不可以Vortex)。

3. 加入用于转化的DNA (10 ng/10 ml以下)。

4. 在冰中放置30分钟后，42℃放置45秒。

5. 立即移入冰中放置1 ~ 2分钟。

6. 加入预先保存在37℃的SOC培养基900 ml。

7. 37℃振荡培养1小时 (160 ~ 225 rpm)。

8. 适量涂平板。37℃放置一夜。

Protocol

Plasmid Vector的转化

Note

运输时，放入干冰中。

不用的部分放在干冰/乙醇中冷冻，-80℃保存。

转化时，除用试管 (Falcon No. 2059) 外，还可以用Eppendorf tube，但转化效率稍低。

使用100 ml Competent Cells转化时，DNA的使用量不能大于10 ng。

除SOC培养基以外，LB培养基或fb-broth也可使用，但有时效率稍低。

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使用注意