E. coli Electro-Cells

JM109

D9022

1 Set (50 ml×10支)

300 元

DH5a

D9027

1 Set (50 ml×10支)

300 元

制品说明

用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌，从而导致DNA转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一，比Ca2+处理的感受态细胞的转化效率高，在转化少量DNA时，特别能发挥其特有的威力。

TaKaRa使用自己独特的菌体培养法，制作出了效果极佳的E. coli Electro-Cells 。

细胞种类

a-互补性选择宿主E. coli JM109

E. coli JM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM109 F'编码的lacZaM15相结合，从而显示b-半乳糖苷酶活性 (a-互补性)。利用这一特性, 可以很容易鉴别重组体菌株。因为具有F'质粒， 除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外，也可作为M13载体DNA的宿主，制备单链DNA。

a-互补性选择宿主E. coli DH5a

E. coli DH5a在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和DH5a编码的lacZDM15相结合，从而显示b-半乳糖苷酶活性 (a-互补性)。利用这一特性, 可以很容易鉴别重组体菌株。DH5a可以用于制作基因库、进行亚克隆等。

由于DH5a具有deoR变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。

质量标准

使用10 pg的质粒DNA进行转化时：

50 ml E. coli Electro-Cells/10 pg pUC19 plasmid转化时产生的菌落数

>1×109 transformants/1 mg pUC19 plasmid

b-半乳糖苷酶、a-互补性的确认

E. coli JM109:

对E. coli Electro-Cells JM109使用pUC19 DNA进行转化后，在含有100 mg/ml 的Ampicillin、0.2 mM的IPTG，40 mg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落占总菌落数的1%以下。

E. coli DH5a:

对E. coli Electro-Cells DH5a使用pUC19 DNA进行转化后，在含有100 mg/ml 的Ampicillin、40 mg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。

50 ml的E. coli Electro-Cells在含有100 mg/ml的Ampicillin L-琼脂平板培养基上不产生菌落。

Protocol 1

1. Electro-Cells (50 ml) 使用前在冰中融解。

2. 在融解的Electro-Cells中加入1 ~ 2 ml DNA溶液 (有盐存在时用乙醇沉淀脱盐)。

3. 将Electro-Cells及DNA混合液注入在冰中冷却的0.1 cm冲击槽 (Cuvette)。

4. 冲击后，向冲击槽中加入1 ml 冰中预冷的SOC培养基。

5. 菌液取出后置于试管中37℃振荡培养1小时 (160 ~ 225 rpm)。

6. 取适量涂平板。

7. 37℃放置一夜。

Plasmid Vector的转化

Protocol 2

1. 同Plasmid vector的转化操作步骤1. ~ 4.。

2. 在3.5 ml的YT-Soft agar (46 ~ 48℃中保温) 中，加入200 ml的宿主菌 (A600=0.8 ~ 1.0)。

3. 取1.的适当量与2.的Agar混和，在YT-plate上铺开。

4. 平板于室温放置10 ~ 15分钟，37℃培养一夜。

M13 Phage Vector的转染

Note

运输时，放入干冰中。

不用的部分放在干冰/乙醇中冷冻，-80℃保存。

转化时，除用试管 (Falcon No. 2059) 外，还可以用Eppendorf tube，但转化效率稍低。

导入分子量大的DNA (>7 kb) 时，转化效率稍低。

除SOC培养基以外，LB培养基或fb-broth也可使用，但有时效率稍低。

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使用注意