Q-1.FH11

从材料中获取基因

在进行目的蛋白的表达、构建表达载体等实验时，通常需要获得一段目的基因。我们可以根据您提供的已知参考序列（NCBI上已发表)，以基因组DNA或总RNA为模板，获取您所需要的某个区域的一段基因。

服务内容

● 基因组DNA/总RNA的提取

● 以基因组DNA为模板通过PCR扩增得到目的基因

● 以总RNA为模板通过RT-PCR扩增得到目的基因

● 目的基因PCR产物的纯化及测序

● 目的基因的克隆及测序

● 目的基因亚克隆至表达载体中

服务说明

1. 我们目前接收的样品形式为与参考序列物种一致的材料或上述材料的基因组DNA/总RNA。

1) 实验材料必须保证新鲜，请您采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂（如Sample Protector

<TaKaRa Code: D311A>)。

2) 基因组DNA/总RNA无明显降解，总量大于5 mg。如果基因丰度较低或调取的基因较长，请您提供尽

量多的材料。

2. 由于材料的个体差异及PCR过程中会产生突变等原因，我们不保证获取的基因与参考序列的碱基完全一致。

价格·实验周期

以上实验费用及周期是针对正常实验样品制定的，样品特殊或样品多时除外。

提供结果

实验报告（包括具体实验步骤、照片等)、测序彩色波形图、测序方向图、序列碱基图、酶切位点图、保存电子版结果的CD光盘、含有目的基因的质粒及穿刺菌保（或PCR产物)、引物等。

如果您需要进行此项服务,请填写“从材料中获取基因服务委托书”。您可以在本商品目录的Q-16页或网站下载获得表格,填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。

cDNA 末端的快速

扩增（RACE）

在通过杂交、cDNA文库等方法筛选到一段非全长的cDNA序列后，我们可以通过RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 实验进一步扩增此cDNA的5' 末端或3' 末端，从而得到全长的cDNA。

服务内容

● 总RNA提取

使用TaKaRa RNAiso Reagent (TaKaRa Code: D312)，从动物组织、植物材料、培养细胞、全血等材料中提取高质量的总RNA。

● 已知序列的验证

根据客户提供的已知序列设计引物，以总RNA为模板进行RT-PCR扩增，验证参考序列的存在及方向。

● 5' RACE

使用TaKaRa 5' -Full RACE Kit (TaKaRa Code: D315) 进行5' RACE实验，试剂盒中的Tobacco Acid Pyrophosphatase能有效识别mRNA 5' 末端的帽子位点，从而保证后续的PCR反应扩增得到可信度高的5' 末端cDNA全长产物。

● 3' RACE

使用TaKaRa 3' -Full RACE Core Set Ver.2.0 (TaKaRa Code: D314) 进行3' RACE实验，试剂盒中独特的Adaptor设计及Nested PCR更能提高PCR反应的特异性与灵敏度，从而轻松获得3' 末端的cDNA全长产物。

● 对获取的序列进行验证

分别在已知序列和获取的序列上设计引物进行RT-PCR扩增，并对PCR产物进行测序，以验证获取的5' RACE或3' RACE序列与已知序列是否连续存在于同一条cDNA片段上。

服务说明

1. 我们目前接收的样品形式为与已发表的部分参考序列物种一致的材料或上述材料的总RNA。

1) 实验材料必须保证新鲜，请您采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂（如Sample Protector

<TaKaRa Code: D311A>)。

2) 总RNA无降解，无基因组DNA污染OD260/OD280在1.8-2.0之间。

3) 3' RACE实验要求总RNA量大于10 mg，5' RACE实验要求总RNA量大于15 mg。如果基因的丰度较低

或者未知序列较长，请提供尽量多的实验材料。

2. 已知的参考序列长度≥150 bp。我们将对已知序列进行验证，如果验证结果与您提供的序列完全不符，

我们将停止实验并收取实验成本费用。如果验证结果与您提供的序列有个别碱基不符，我们在征求您的意见后决定是否进行RACE实验。

3. 如果RACE实验中的PCR产物测序结果出现套峰，我们将采取克隆测序的方法，其碱基的准确性由您自

行判断。

4. 如果您的样品为原核生物，我们不保证调取的RACE序列为全长序列。

价格·实验周期

以上实验费用及周期是针对正常实验样品制定的，样品特殊或样品多时除外。

提供结果

实验报告（包括具体实验步骤、照片等)、测序彩色波形图、测序方向图、序列碱基图、酶切位点图、保存电子版结果的CD光盘。

如果您需要进行此项服务,请填写“RACE服务委托书”。您可以在本商品目录的Q-17页或网站下载获得表格,填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。

DNA侧翼未知序列获取

获得与已知序列相邻的未知序列的染色体步移技术 (Genome walking) 即侧翼序列获取，是一项重要的分子生物学研究技术。侧翼序列获取主要有以下几方面的应用：

1) 根据已知的基因或分子标记连续步移获取人、动物和植物的重要调控基因，用于研究结构基因的表达调控；

2) 步查获得新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列；

3) 鉴定T-DNA或转座子的插入位点，以及鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点；

4) 用于染色体测序工作中的空隙填补，从而获得完整的基因组序列；

5) 用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。对于基因组测序已经完成的少数物种（如人、小鼠、线

虫、水稻、拟南芥等）来说，可以轻松地从数据库中找到已知序列的侧翼序列。但对于自然界中种类繁多的其它生物而言，在不知道它们的基因组DNA序列以前，想要知道一个已知区域两侧的DNA序列，只能采用染色体步移技术，进行侧翼序列获取。

我们使用TaKaRa Genome Walking Kit (TaKaRa Code: D316) 为客户进行技术服务。这种方法具有高效、简便、特异性高、一次性获得的未知序列较长等其它传统方法不可比拟的特点。如果一次获取长度不够，还可以根据一次获取序列的结果再设计特异性引物，利用TaKaRa Genome Walking Kit 继续进行侧翼序列获取。

服务内容

● 已知序列的验证

根据客户提供的已知序列设计引物，以材料的基因组DNA为模板进行PCR扩增，以验证已知序列是否在模板中存在。

● 5' 或3' 未知序列的获取

根据已知序列设计3条高退火温度的特异性下游或上游引物，同时使用试剂盒中低退火温度的简并引物AP1、AP2、AP3、AP4中的一种，利用特异性引物与简并引物之间退火温度的差异进行不对称PCR，通过三次巢式PCR获取侧翼序列。

● 对获取的序列进行验证

获取侧翼未知序列后，我们将分别在已知和未知序列上设计引物进行PCR扩增并对PCR产物进行测序,以验证获取序列的真实性。