腺病毒载体作为一种表达载体，其诸多优点如下：

● 能够得到高滴度的病毒。应用本公司试剂盒可轻松得到108 -109 pfu/�ml的病毒溶液，并可进一步浓缩为1011

pfu/�ml。因此它可以使靶基因感染近100%的贴壁细胞。

● 可以广泛应用于各种动物。

● 可以使静止期细胞或增殖期细胞表达靶基因。

● 可以在许多分化或未分化培养动物细胞中使用，包括神经系统细胞。可以通过直接融合或注射入动物体内

的方法表达基因。

本公司目前有两种腺病毒表达系统供客户选择。

使用TaKaRa Adenovirus

Expression System

进行载体构建

使用TaKaRa Adenovirus Expression System Vector Kit (Dual Version) 进行实验，它包含两种粘粒载体供客户选择。

● pAxcwit (42,649 bp): 不含有启动子的标准载体。可插入7 kbp的外来DNA。

● pAxCAwtit (44,990 bp): 含有哺乳动物CAG启动子（巨细胞病毒增强子，鸡b-肌动蛋白启动子，鼠b-

肌球蛋白poly(A)信号)。

每种都含有全长的腺病毒基因组基因（E1,E3缺陷型)，可以插入5 kbp的外源基因。靶基因的编码区插入pAxCAwtit后可以得到高水平的表达。当使用其它启动子时，需要把一个表达框（启动子+靶基因编码区+ poly(A)信号）插入到pAxcwit载体中。插入靶基因的粘粒可以使用BspT104 I 消化全长DNA后导入HEK293细胞，也可以使用DNA-TPC (TaKaRa Code: 6171) 和重组粘粒共转染HEK293细胞，得到理想的重组腺病毒。

简单操作流程如下图：

腺病毒载体制作原理图

腺病毒载体结构图

服务内容

● 将目的基因构建至粘粒载体

● 确认构建粘粒的结构

● 大量扩增构建的粘粒载体

服务说明

1. 我们接收的样品形式为：含有目的基因的质粒（质粒量≥10 mg）或菌种。

2. 如果需要进行基因调取，具体说明请详见Q-1“从材料中获取基因”。

价格·实验周期

提供结果

● 含目的基因的重组腺病毒粘粒10 mg以上。

● pAxCAwtit Negative Control Cosmid 3 mg，可以做为转染、表达的阴性对照。

● pAxCAiLacZit (pAxCAwtit插入b-gal) Control Cosmid 3 mg，可以做为转染、表达的阳性对照。

● 实验报告（包括具体实验步骤、实验照片等）。

使用 Clontech Adeno-XTM

Expression System2

进行载体构建

试剂盒中提供了三种受体载体，具体功能如下：

● pLP-Adeno-X-CMV 为您的目的基因提供强大的连续表达，带有强启动子CMV。

● pLP-Adeno-X-TRE 依赖Adeno-X Tet-off & Tet-on调节的方式，使您能调控基因的表达。

● pLP-Adeno-X-PRLS 一种无启动子的载体，便于您研究由您自己选择的启动子启动的基因表达。

本系统能快速方便地利用特定Cre-loxP 重组位点来构建重组腺病毒载体。Cre-loxP 重组是许多CreatorTM基因克隆和表达系统的基础，Cre是一种来源于噬菌体P1的38 kDa的重组酶蛋白，在loxP位点辅助DNA序列间发生同源重组，通过此法转入腺病毒载体的外源基因最大长度可达7 kbp。经同源重组所得的腺病毒载体，可以使用Pac I消化后导入HEK293细胞生成侵染性的腺病毒。

简单操作流程如下图：

服务内容

● 将目的基因克隆至pDNR-CMV载体

● 含有靶基因的pDNR-CMV载体与上述三种受体载体之一进行同源重组反应

● 确认构建腺病毒质粒载体的结构

● 大量扩增构建腺病毒质粒载体

服务说明

1. 我们接收的样品形式为：含有目的基因的质粒（质粒量≥10 mg）或菌种。

2. 目的基因可连接在任意一种载体上，但基因两侧需含有pDNR-CMV载体MCS上的酶切位点。

3. 如果需要进行基因调取，具体说明请见Q-1“从材料中获取基因”。

价格·实验周期

提供结果

● 含目的基因的重组腺病毒质粒10 mg以上。

● 含目的基因的pDNR-CMV载体质粒3 mg。

● 实验报告（包括具体实验步骤、实验照片等)。

如果您需要进行此项服务,请填写“重组腺病毒载体构建服务委托书”。您可以在本商品目录的Q-21页或网站下载获得表格,填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。